电针对慢性复合应激抑郁模型大鼠行为及对海马内单胺类递质含量的影响

电针对慢性复合应激抑郁模型大鼠行为及对海马内单胺类

递质含量的影响

刘江杰 田玉娥 陈莉 李敏

[摘要] 目的 观察电针对慢性应激抑郁模型大鼠行为学和海马单胺类神经递质的影响，探讨电针治疗抑郁可能存在的神经调节机制。方法 将40只SD大鼠随机分为正常组、模型组，电针组、百优解组，每组各10只,应用分养和长期不可预见性中等强度应激造成抑郁症模型，造模同时电针和百优解治疗。以蔗糖水试与体重测定、Open-field法对照研究针刺对慢性应激诱导的抑郁症模型大鼠行为学的改变；应用RP-HPLC碳光检测法对照研究针刺对模型大鼠海马单胺类神

经递质的改变。结果 行为学测定,与正常对照组比较,模型组开野实验的水平运动次数和垂直运动次数、糖水的摄入量与体重变化量均显著减少 (“P<0.01或

0.05”)。而用盐酸氟西汀与电针治疗后大鼠的水平活动、垂直活动次数、糖水的摄入量以及体重变化量虽然较正常组减少，但较模型组改善(“P<0.05”)。海马内单胺类神经递质含量测定发现，与正常组相比，模型组大鼠海马5-HT、DA和NE含量均显著降低(“P<0.05”)。与模型组相比，电针组和百优解组模型大鼠海马内5-HT、DA和NE含量显著升高(“P<0.05”)；但百优解组NE含量与正常组相比差异仍有显著性意义(“P<0.05”)。而中电针组各单胺类测量值略低于正常组水平，但

无统计学差异。结论 脑卒中后抑郁症动物模型脑内单胺类神经递质含量降低;行为学表明活动减少，兴趣、快感缺乏。电针与盐酸氟西汀均可以改善抑郁大鼠

的行为及脑内单胺类神经递质水平。而电针的优势在于整体调整，安全可靠，无毒副作用及成瘾性。因此，是一种较好的治疗抑郁症的方法。

[关键词] 抑郁；电针治疗；大鼠行为；海马；单胺类神经递质

[Abstract] Objective To observe influence of ethology in chronicity stress depression model rat and hippocampus major monamine neurohormone trans -mitter treated by Electroacupuncture. And to approach possible neural regula -tion mechanism of depression by Electroacupuncture. Methods 40 SD rats will be divided into four groups: normal group, model group, Electroacupunc -ture group , Fluoxetine Hydrochloride group ;Every group have 10 SD rats. The depressive disorder model were designed by demixing feeding and long -term in-prediction medium intensity stress, at the same time using Electroacu -puncture and Fluoxetine Hydrochloride . Results Ethology assay indicate , compare with normal control group, frequency of horizontal movement and frequency of vertical movement、the intake of sacchar and body weight changes in model group decrease signifi cantly ( P<0.01 or P<0.05), but change of frequency of horizontal movement and frequency of vertical movement. the intake of sacchar and body weight changes in Electroacupuncture group and Fluoxetine Hydrochloride group decrease,compare with normal groups; but improve compare with model groups. Hippocampus major mona -mine neurohormone transmitter assaying indicate the content of 5-HT、DA and NE in model group are decreased signifi cantly ,compare with normal groups (P<0.05). The content of 5-HT、DA and NE in Electroacupuncture group and Fluoxetine Hydrochloride group are heightened signifi cantly, compare with model groups (P<0.05).But the content of NE in Fluoxetine Hydrochloride group have statistics difference,compare with normal groups; and the content of monamine neurohormone transmitter have no statistics difference, compare with normal groups. Conclusion Monamine neurohor -mone transmitter in poststroke depression animal models decreased signify -cantly. Ethology assay indicate activity and interst in animal models are less -ened, and accompanying ahedonia. Electroacupuncture and Fluoxetine Hydro -chloride can improve behavior of depressive disorder model rats and the level of monamine neurohormone transmitter. And the advantage of Electro -acupuncture is adjusted entirety ,reliability, no toxic and side-effect, addiction. Electroacupuncture is better methods for depression treatment.

[Key wolds] depression; electro-acupuncture treatment; rats behavior; hippocampus; monamine neurohormone transmitter

抑郁症是由多种原因引起的、以抑郁为主要症状危害全人1.1 实验材料

类身心健康的一组心境障碍或情感障碍疾病,近年来发病率不1.1.1 实验动物 选用SD雄性大鼠40只，体重250g左右，由断上升, 对人类健康的巨大危害日益明显。抑郁症目前主要是第三军医大学实验动物中心提供。

药物治疗，由于抑郁症是多系统病变,药物治疗多针对单靶点进1.1.2 实验试剂与仪器 试剂：蔗糖(北京化学试剂公行,长期应用疗效降低,且有严重的毒副作用和过量的危险性。司)；百优解胶囊(美国Lilly公司制造)；盐酸去甲肾上腺素自针灸介入抑郁症治疗以来，取得了确切疗效，而且具有整体(L-NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT),均为SIGMA公司产调节、无副作用、简便易行的优点，但对作用机制尚不清楚。品。仪器: VARIAN高效液相色谱仪；高速冷冻离心机；pH我们以选择性5-羟色胺再摄取抑制剂百优解(盐酸氟西汀)作对计 (HANNA PH201); BP211D电子天平(瑞士赛多利斯公司)；照，模拟人的慢性应激刺激设计慢性应激模型,通过给予大鼠长LH-202型HANS电刺激仪；旷场箱。

期的慢性应激刺激,导致大鼠产生抑郁状态,来探讨电针治疗改1.2 实验方法

善抑郁症状可能存在的神经机制。

1.2.1 动物分组和处理

1 材料与方法

健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠先通过开野实验将基金项目：*国家自然科学基金资助项目 (编号30670712) 重庆市自水平运动次数加垂直运动次数不足30次或超过120次的大鼠剔然科学基金资助项目 (编号CSTC,2006BB5061)

除,然后随机分为正常组、模型组、电针组、百优解组,每组10 作者单位：830063 兵团指挥部医院 (刘江杰 田玉娥 陈只。将大鼠在动物饲养室中适应1周, 每笼5只，室温22～25℃,莉); 400038 第三军医大学护理系心理学教研室 (李敏)

自然昼夜节律光照,通风良好, 自由摄食、饮水。

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1.2.2 电针与给药方法

将大鼠置于塑料盘中，采用人工手扶，不予以束缚固定。取百会、印堂、足三里(单侧)、三阴交(单侧)。分别插入不锈钢针，连接到LH-202型HANS电刺激仪。电针频率为2Hz，刺激强度不超过2mA，共电针20min，每日一次。实验期间保持安静，并尽量采取轻柔操作，避免引起动物的不适。百优解给药量为2.6mg/kg,按0.2mL/10g灌胃,每日1次。先电针与给药，后应激。

1.2.3 造模方法与取材

根据慢性不可预知的应激模型的造模和行为测试方法建立[1]，造模动物全部孤养,接受7种不同的应激刺激21d，每日随机安排以下一种刺激，具体如下：断水24h、断食24h、夹尾3min、制动2h、45℃热烘5min、10℃冷水游泳15min、通宵照明,平均每种刺激3次。造模同时电针治疗和给药(方法同上)。开始慢性应激程序时即改为每笼1只孤养。除了实验期间的特殊要求外，其余时间自由进食和饮水，自然光线。空白对照组无应激仍每笼5只正常饲养，每日空抓数次。于第22d进行开野实验及糖水实验测定。然后，断头处死动物，在冰皿上快速剥离全脑并分离出皮层、海马，称重，-80℃冰箱保存。

1.2.4 糖水实验与体重测量

糖水消耗实验：造模前和造模后第21天，让各组动物任意饮用两种不同的水：其中一瓶为合1%蔗糖的自来水，一瓶为自来水。通过称饮水瓶重量测定7：00AM至次日7：00AM自来水和蔗糖水饮用量，以蔗糖偏嗜度(sucrose preference)(蔗糖偏嗜度%=蔗糖水饮用量/(蔗糖水饮用量十自来水饮用量)×100)作为衡量标准，比较造模前后各组动物蔗糖偏嗜度的变化。

体重测量：于慢性应激程序开始前(处理前)和结束时(处理后)，分别检测大鼠体重。

1.2.5 开野法检测探究活动性

将大鼠单个放入开野箱(长宽均为90cm，高40cm，底部为等面积的25格)的格，开始记录大鼠的活动。以双后肢穿越一方格边界记为一次水平运动(crossing)，以两前肢离地且直立记为一次垂直运动(rearing)，二者反映动物的探究活动(exploratory activity)，共检测3min。实验期间保持安静，及时清除每只动物的排泄物，各组动物交替测试。每只动物进行1次(次/3min)。

1.2.6 单胺类神经递质含量测定 采用RP-HPLC碳光检测法测定大鼠脑组织中4种神经递质的含量。样品处理:取出称币过的大鼠脑海马组织，置入lm1玻璃组织匀浆器中，加入预冷的0.1%高氯酸400u1，在冰浴中转动10min，充分研磨使组织匀浆化后，将组织匀浆液倒入离心管内，置离心机内以(4℃)10000×g离心20min,吸取上清液，用0.1%高氯酸溶液定容至0.5ml。色谱条件:色谱柱:YMC-C18柱(250×4.6mm,5um)。流动相0.lmol/L，的醋酸钠(内含0.lmmo1/L的EDTA-2Na)，用HAC调节pH5.1，用0.45um的微孔滤膜过滤，超声脱气，此缓冲液为流动相B，甲醇为流动相A，按比例9:1等度洗脱，流速为1.0m1/min,每次进样30μl，发射波长330nm，激发波长290nm。柱温:32℃。

1.2.7 数据处理方法

所有数据以均值±标准差(x±s)表示，数据资料用

36SPSS13.0统计软件包处理，采用单因素方差分析(one-way ANOVA)，以P<0.05作为统计学差异显著性的标准。

2 结果2.1 各组大鼠糖水消耗实验结果

与正常对照组比较,造模后大鼠的蔗糖偏嗜度显著减少 (“P<0.05”)。而用百优解与电针治疗后大鼠的蔗糖偏嗜度基本接近正常大鼠，差异无统计学意义。见表1。

2.2 各组大鼠 Open-feild行为学测定

与正常对照组比较,造模后大鼠的水平活动、垂直活动次数均显著减少 (“P<0.01或0.05”)。而用盐酸氟西汀与电针治疗后大鼠的水平活动、垂直活动次数虽然较正常组减少，但较模型组改善(“P<0.05”)。见表2。

2.3 各组大鼠各组大鼠体重变化测定结果

各组大鼠体重在实验前未见有意义的差异。在实验的第22天称量，体重变化出现了有显著性意义的差异，各组大鼠体重依次为:正常组>电针组>百优解组>模型组，模型组大鼠的体重显著低于其它各组，且有显著性差异(“P<0.01或0.05”)。见表3。

2.4 各组大鼠海马内单胺类神经递质的变化

与正常组相比，模型组大鼠海马5-羟色胺、多巴胺和去甲肾上腺素含量均降低(“P<0.05”)。与模型组相比，电针组和氟西汀组模型大鼠海马内5-羟色胺、多巴胺和去甲肾上腺素含量显著升高(“P<0.05”)；但是氟西汀组NA含量与正常组相比差异仍有显著性意义(“P<0.05”)。而中电针组各单胺类测量值略低于正常组水平，但无统计学差异。见表4。

3 讨论 抑郁症的病理生理机制迄今不明确。目前认为，抑郁症是遗传因素和环境因素相互作用的结果[2]。近年来研究发现,应激性生活事件是抑郁症的明显促发因素，并且认为，慢性、低强度、长期的日常压力是引发抑郁的主要原因。本实验采用的慢性应激抑郁模型，其理论依据与人类抑郁症中慢性、低水平的应激源导致抑郁症的发生的机理接近。

多数学者认为，慢性应激抑郁模型主要模拟了人类抑郁症的核心症状，对奖赏的反应性下降，即快感缺乏，食欲减退[3]。目前国外大多数学者利用大鼠对蔗糖水的嗜好，模拟人类的兴趣感，采用糖水消耗实验来测量快感缺乏。本实验结果表明，模型组大鼠蔗糖偏嗜度明显降低，提示这种模型反映了动物对幸福事件反应能力的下降，快乐体验能力的缺乏[4]。慢性应激抑郁模型也模拟了许多其他重型抑郁障碍的症状表现，如运动能力及社会交往能力下降、探索行为能力下降等，其中水平运动反映了动物的活动度的降低，垂直运动反映了动物对新鲜环境的好奇程度降低[5]。本实验中，与正常组比较，模型组水平活动次数与垂直活动次数明显减少；用药组与电针组大鼠的水平活动次数虽然较正常减少却明显高于模型组，而垂直活动次数与正常组比较基本无差异；用药组与电针组之间比较无差异，说明电针具有改善抑郁的作用。应激前后动物的体重增长情况显示，与正常组比较，所有经历慢性应激的各组大鼠体重增长均明显减慢，与模型组比较，用药组与电针组慢性应激抑郁大鼠体重增长略有提高。因此，慢性应激抑郁动物抑郁模型是研究抗抑郁药物的一种较好的模型，同时电针具有一定的抗抑郁

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表1 各组大鼠糖水摄入量变化(x±s，%)抑郁症的发病机制之一被认为是由于机体内单胺递质含量组别 n 处理前 处理3w后减少所致[6]。目前的治疗方法主要是药物治疗，具有抗抑郁作用的药物可能通过使体内单胺递质含量增多，从而产生抗抑郁空白对照组 10 83.40±7.56 81.19±8.41作用。百优解是一种选择性5-羟色胺再摄取抑制剂，可以通过模型组 10 84.67±8.09 53.25±13.08*增加大脑自身的5-羟色胺供给来纠正这种神经递质的缺乏，从百优解组 10 85.95±6.83 78.08±13.37#电针组

10

84.39±7.24

76.63±14.44#

而能够有效控制抑郁症的症状。而对去甲肾上腺素、多巴胺再摄取影响极少，本研究结果也证实了这一点。针对单靶点予以注：与空白对照组相比，*P<0.05；与模型组相比，#P<0.05。药物治疗抑郁症，长期应用疗效降低，且有严重的毒副作用和表2 各组大鼠活动性的变化(x±s,次/180s)过量的危险性，而抑郁症是多种神经递质的紊乱。近年来普遍认为电针可提高大脑皮质兴奋性，具有扩张血管、增加脑血流组别 n 水平运动 垂直运动量、改善脑血流灌注的作用。在电针方法上选择电针，他具有空白对照组 10 48.40±13.56 10.21±3.23双向良性调节作用，可以通过神经系统、免疫系统来调整大脑模型组 10 12.47±7.09** 4.25±3.38*皮层中枢兴奋和抑制过程，使脑内神经突触间各种神经递质趋百优解组 10 26.65±7.63*# 8.37±3.41#电针组

10

23.39±8.24*#

9.66±4.4#

于平衡[7]，而且能够逐渐调整生理与心理的失衡状态，从而改善抑郁临床症状，达到治疗的目的。本研究结果显示，电针对注：与空白组比较:*P<0.05,**P<0.01；与模型组比较:#P<0.05，行为学改善与氟西汀不一样，电针可使海马内单胺类递质含量##

P<0.01。和利用均升高，从而改善了动物的抑郁状态。

表3 各组大鼠体重的比较(x±s, g)综上结果分析可见，电针可使抑郁大鼠活动增多、兴趣提组别 n 处理前 处理3w后 3w体重增加高、快感增加、食欲增加，从而证明了电针可以改善动物的抑郁状态，并且具有整体调节的优势，无毒、副作用。空白对照组 10 253.50±9. 372.33±26.71 118.83±18.44　　模型组 10 252.33±7.10 301.13±17.40** 48.80±14.52**参考文献

百优解组 10 252.65±9.95 324.37±13.41* 71.72±13.63*电针组

10

252.24±7.63

329.20±16.06

76.96±11.28*

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模型组 10 0.42±0.12** 1.16±0.74**

0.43±0.16**[5] Gregus A,Wintink AJ,Davis AC,et al.Effect of repeated 百优解组 10 0.51±0.21* 1.49±0.77 0.76±0.21#corticosterone injectionsrats and restraint stress on anxiety and depression-like 电针组

10

0.69±0.32

1.88±0.62#

0.67±0.17#

behavior in male rats.Behav Brain Res,2005,156(1):105-114.

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