生命科学与实验研究生物技术 世界阿纳其根对小鼠急性毒性实验研究肖开提·艾白都拉 买合素提·卡德尔 伊利亚尔·斯马伊(1.维吾尔自治区维吾尔医药研究所 乌鲁木齐 830049 ;2.维吾尔医方剂学实验室 乌鲁木齐 830049)摘要:目的:研究阿纳其根对小鼠的急性毒性的影响,保证安全用药提供一定的科学根据。方法:采用经典的小鼠急性毒性试验方法,进行阿纳其根不同剂量对小鼠的急性毒性研究,按照40 mL·kg-1采用灌胃给药,实验数据用千克体重法来计算最大给药量(MLD)和灌胃给药半数致死量(LD50),连续观察14天受试药物对小鼠指标的影响,测定最大给药量。结果:按生药量计算阿纳其根对小鼠的最大给药量(MLD)为8.31g·kg-1·d-1。随着用药计量的增加,小鼠的死亡数和死亡率逐渐增加。结论:阿纳其根的灌胃的小鼠急性毒性大,毒性反应非常强烈,毒性全部的成分和作用机制尚不清楚,需要作进一步的研究。通过对阿纳其根的急性毒性的研究,为阿纳其根的安全用药提供了实验根据。关键词:小鼠 急性毒性 半数致死量中图分类号:R446文献标识码:A文章编号:1674-2060(2015)10-0022-01阿纳其根可制成散剂、膏剂、舔剂、牙粉、小丸剂、漱口剂、油剂等制剂,内服外用均可。但是,在临床应用过程中,国内外的临床不良反应报道逐渐增多,屡屡发生中毒事件,性质比较严重。现通过阿纳其根对小鼠的急性毒性实验,为阿纳其根的临床安全用药提供了实验根据。小鼠进行禁食,采取空腹饲养,但不禁水,按40 mL·kg-1给予小鼠灌胃阿纳其根药物,对照组的10只小鼠用等体积的生理盐水,并进行急性毒性实验的观察和记录。2.3 小鼠急性毒性正式实验观察方法各组小鼠在灌胃给药后正常饲养,在2h之内,每隔15分钟要进行观察1次;在用药后2～4h之内,每隔半个小时后观察1次;在用药后4～8h之内,每隔1小时观察1次;药后8～24h之内,每4h观察1次;在用药后第2天起,只需要每天观察1次,并称取小鼠体重、进食、饮水情况以及在14天内可能出现的异常情况,比如异常肌肉运动、异常分泌物、眼球凸出、呼吸异常等毒性反应,并注意小鼠死亡情况。1 材料与方法1.1 药物阿纳其根是购于巴基斯坦,由经维吾尔自治区维吾尔医院药剂科主任鉴定为菊科植物除虫菊［Anacyclus pyrethrum(L)DC］的干燥根,为分析纯。临时用生理盐水或这是蒸馏水稀释成所需浓度溶液,实验前用蒸馏水混悬做灌胃用3 结果对灌胃阿纳其根和蒸馏水的小鼠出现的急性毒性症状进行观察,对照组的小鼠正常生长发育,表现正常。阿纳其根灌胃给药的最大给药量8.31g·kg-1·d-1。随着用药剂量的增加,小鼠的死亡数和死亡率呈逐渐上升趋势,详细结果见表1。在14天观察期内,死亡前小鼠的急性毒性症状主要有全身肌肉无力、垂头和肢无力、眩晕、昏迷、眼睑下垂、吞咽困难、腹痛、腹泻,逐渐呼吸困难和神经麻痹,最终导致呼吸衰竭而死亡。存活小鼠的体重增长比较慢,未见有其他的明显异常情况。1.2 受试动物昆明种SPF级小鼠,雌雄各半,取体重18～22g的健康适龄小鼠共70只,由山东中医药研究所实验动物中心提供,合格许可证号是SYXK(鲁)20150086。1.3 饲养条件保持室内温度在25℃左右,相对湿度维持在50％左右,12/12h为一个明暗周期,分笼饲养,试验期间小鼠可以自由饮用灭菌纯化水,纯化水是经121℃灭菌半小时得到的,有效期为14天,以普通柱状饲料来饲养。1.4 仪器与试剂YP601N电子天平由上海精密科学仪器有限公司生产,型号为01193,KDM型调温电热套由山东鄄城华鲁电热仪器有限公司生产;HHS恒温水浴锅由江苏金坛市医疗仪器厂提供。4 讨论阿纳其根是重要的维吾尔药之一,又称阿克尔,开尔哈,是菊科植物除虫菊的干燥根。本研究中,阿纳其根原生药粉末LD50=7.39g/Kg,阿纳其根对灌胃的小鼠急性毒性大,毒性反应强烈,但是,毒性全部的成分和作用机制尚不清楚,需要作进一步的研究。参考文献[1]古丽娜尔·卡斯木,马庆苓,古丽米热·卡哈尔,阿吉艾克拜尔·艾萨.阿纳其根脂肪酸成分分析及其对蛋白酪氨酸磷酸酯酶1B抑制作用研究[J].天然产物研究与开发2014,26:1835-1838[2]李荣荣,杨勇,丁嘉信,秦超,李静.细辛不同提取物对小鼠急性毒性实验的比较研究[J].中国药物警戒,2012,6(9):321-324.[3]黄伟,孙蓉,张作平,等.柴胡总皂苷粗提取物对小鼠急性毒性实验研究[J].中国药物警戒,2010,7(9):520-523.[4]谢元璋,孙蓉,张亚囡,钱晓路.养血生发胶囊对小鼠急性毒性实验研究[J].中国药物警戒,2011,4(8):280-281.2 方法参照经典的小鼠急性毒性实验方法LD50首先进行测定预试,最大耐受量MTD、最大给药量MLD和半数致死量LD50。对小鼠给以阿纳其根灌胃,进行急性毒性正式实验,均连续观察两周,记录小鼠的中毒反应、死亡率和死亡情况。2.1 阿纳其根小鼠急性毒性预试验在试验前取禁食12h后小鼠10只,根据体重的不同随机分为两组,分别为阿纳其根组和水对照组,每组各5只。按40 mL·kg-1给阿纳其根组小鼠灌胃给药1次,同时对照组用等体积的水对小鼠进行灌胃。在实验过程中,根据小鼠死亡的情况作适当的调整,分别找出引起小鼠死亡0%(Dn)和100%(Dm)死亡的剂量,并找出相应的剂量组间距r值,然后测定LD50值,并根据预试验结果进行正式试验。2.2 阿纳其根急性毒性LD50的正式试验取昆明种SPF级小鼠70只,雌雄各35只,体重在18～22 g之间,随机分为对照组和实验组,其中对照组10只小鼠,实验组共60只小鼠,随机分为6组,每组10只,在预试实验测得Dn和Dm的剂量范围内设6个剂量组,分别为I、II、II、Ⅲ、IV、V、VI。在实验前12h内,对70只22生物技术世界 BIOTECHWORLD
