安徽科技学院学报，２０１７，３１（１）：４１～４５ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｈｕｉ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ 蛹虫草菌株的交配型鉴定及其部分栽培特征研究 刘敏祥 ，何华奇 ，茅文俊 ，鲍大鹏 （１．安徽科技学院生命科学学院，安徽凤阳２３３１００；２．上海市农业科学院２０１４０３） 食用菌研究所， 农业部南方食用菌资源利用重点实验室，国家食用菌工程技术研究中心，国家食用菌加工技术研发分中心， 上海市农业遗传育种重点开放实验室，上海摘要：目的：通过对２３株不同蛹虫草菌株的交配型鉴定以及出菇性状、产量和栽培周期等指标的比较， 选择出早期识别交配型的简洁方法及优良的菌株。方法：利用ＰＣＲ和溴百里酚蓝脱色法鉴定不同蛹虫草 菌株的交配型；通过序列比对及对溴百里酚蓝的脱色率比较，同时统计分析各菌株产量、子实体形态和栽 培周期等农艺性状差异。结果：双交配型菌株对溴百里酚蓝的脱色率远高于单交配型菌株；单交配型ＣＭ 一１５、ＣＭ一１６、ＣＭ一１９的子实体产量最高，分别为１７．５２ 瓶、１７．８０ ｇ／瓶和１８．９６ ｇ／瓶，生物学效率为 ５８．４～６３．２％，栽培周期６６～６９ ｄ，但与双交配型ｃＭ一３没有显著差异。结论：利用溴百里酚蓝可以对蛹 虫草交配型进行早期鉴定，但脱色率与产量等农艺性状间不存在显著相关性；ＣＭ一１９为优良菌株。 关键词：蛹虫草；交配型；鉴定；栽培学特征 中图分类号：￥６４６．９ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７３—８７７２（２０１７）０１—００４１一Ｏ５ Ｉｄｅｎｔｉｉｃａｔｆｉｏｎ ｏｆ Ｍａｔｉｎｇ——ｔｙｐｅ ｏｆ Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｍｉｌｉｔａｒｉｓ Ｓｔｒａｉｎｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｐａｒｔｉａｌ Ｃｕｌｔｕｒａｌ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ＬＩＵ Ｍｉｎ—ｘｉａｎｇ ，ＨＥ Ｈｕａ—ｑｘ“ ，ＭＡＯ Ｗｅｎ—ｊｕｎ ，ＢＡ０ Ｄａ—ｐｅｎｇ （１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ａｎｈｕｉ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｅｎｇｙａｎｇ ２３３ １００，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｅｄｉｂｌｅ Ｆｕｎｇｉ，Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｙｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ａｎｄ Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ（Ｓｏｕｔｈ），Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｏｆ Ｓｈａｎｇｈａｉ， Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｅｄｉｂｌｅ Ｆｕｎｇｉ，Ｓｈａｎｇｈａｉ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０１４０３，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｈｅ ｍａｔｉｎｇ—ｔｙｐｅ ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｏｆ ２３ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｍｉｌｉｔａｒｉｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎ－ ｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ ｏｆ ｆｒｕｉｔｉｎｇ，ｗｅｔ ｗｅｉｇｈｔ ａｎｄ ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ ｐｅｒｉｏｄ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｇｅｔ ｔｈｅ ｓｉｍｐｌｅ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｅａｒｌｙ ｉｄｅｎｔｉｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｔｉｎｇ—ｔｙｐｅ ａｎｄ ｅｘｃｅｌｌｅｎｔｆ ｓｔｒａｉｎｓ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅ ｍａｔｉｎｇ—ｔｙｐｅ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｃ．ｍｉｌｉｔａｒｉｓ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｂｙ ＰＣＲ ａｎｄ ＢＴＢ ｄｅｃｏｌｏｒｉｚａｔｉｏｎ．Ｂｙ ｃｏｍｐａｒｉｎｇ ｔｈｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ ｔｈｅ ＢＴＢ ｄｅｃｏｌｏｒｉｚａｔｉｏｎ ｒａｔｅ，ｔｈｅ ａｇｒｏｎｏｍｉｃ ｔｒａｉｔｓ ｓｕｃｈ ａｓ ｗｅｔ ｗｅｉｇｈｔ，ｆｒｕｉｔｉｎｇ ｂｏｄｙ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ ｐｅｒｉｏｄ ｏｆ ｅａｃｈ ｓｔｒａｉｎ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ＢＴＢ ｄｅｃｏｌｏｒｉｚａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｔｈｅ ｄｏｕｂｌｅ ｍａｔｉｎｇ—ｔｙｐｅ ｓｔｒａｉｎｓ ｗａｓ ｆａｒ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｔｈｅ ｓｉｎｇｌｅ ｍａｔｉｎｇ—ｔｙｐｅ ｓｔｒａｉｎｓ，Ｔｈｅ ｗｅｔ ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ ｓｉｎｇｌｅ ｍａｔｉｎｇ—ｔｙｐｅ ＣＭ一１ ５，ＣＭ一１ ６ ａｎｄ ＣＭ一１９ ｗｅｒｅ １７．５２ ｇ／ｂｏｔｔｌｅ，１７．８０ ｇ／ｂｏｔｌｔｅ ａｎｄ １８．９６ ｇ／ｂｏｔｔｌｅ，ｔｈｅ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｆｉｃｉｆｅｎｃｙ ｗｅｒｅ ５８．４～ ６３．２％ａｎｄ ｔｈｅ ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ ｐｅｒｉｏｄ ｗｅｒｅ ６６～６９ ｄ．ｂｕｔ ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｄｏｕｂｌｅ ｍａｔｉｎｇ —ｔｙｐｅ ＣＭ一３．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｄｅｃｏｌｏｒｉｚａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｗａｓ ａｖａｉｌａｂｌｅ ｆｏｒ ｐｒｏｄｉｃｔｉｎｇ ｍａｔｉｎｇ—ｔｙｐｅ ｉｎ Ｃ．ｍｉｌｉｔａｒｉｓ ｓｔｒａｉｎｓ． ｂｕｔ ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｎｏ ｏｂｖｉｏｕｓ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｄｅｃｏｌｏｒｉｚａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ａｎｄ ｔｈｅ ａｇｒｏｎｏｍｉｃ ｔｒａｉｔｓ ｓｕｃｈ ａｓ ｗｅｔ ｗｅｉｇｈｔ；ＣＭ 收稿日期：２０１６一ｏ９—２２ 基金项目：安徽科技学院质量工程项目（Ｘ２０１５０５２，Ｘｊ２０１５４４）；安徽省质量工程项目（２０１５ｃｋｊｈ０２７）。 作者简介：刘敏祥（１９９２一），男，安徽省宿松县人，在读硕士研究生，主要从事食用菌遗传育种研究。 通讯作者：何华奇，副教授，Ｅ— ｍａｉｌ：ｈｈｑ０５９８＠１６３．ｃｏｎ。 ４２ １９ ｗａｓ ａｎ ｅｘｃｅｌｌｅｎｔ ｓｔｒａｉｎ． 安徽科技学院学报 一Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｍｉｌｉｔａｒｉｓ；Ｍａｔｉｎｇ—ｔｙｐｅ；Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ；Ｃｕｌｔｕｒａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ 蛹虫草（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｍｉｌｉｔａｒｉｓ（Ｆｒ．）Ｌｉｎｋ）隶属麦角菌科虫草属，其主要寄生在鳞翅目的蚕蛾科、舟蛾科、 天蚕蛾科等昆虫的蛹上，通过汲取虫蛹的营养，最终形成真菌子座和虫蛹的复合体。蛹虫草在我国的分布 包括辽宁、吉林、黑龙江等地区ｌ１１。由于其生物活性物质近似或部分成分含量甚至高于野生冬虫夏草，常 被作为冬虫夏草的替代品广泛使用。尽管蛹虫草已实现人工栽培，但菌种易退化 。］、生物学效率和生物 活性物质偏低等问题始终制约着蛹虫草产业的可持续发展。 食用兼以药用的蛹虫草在保存和继代培养过程中会发生不同程度退化，常常表现为子实体原基减少， 产孢能力大幅提高或降低，子实体形成受阻 Ｊ。李美娜等 研究表明蛹虫草退化菌株在ＤＮＡ水平上已 经发生了可稳定遗传的变异，即退化不可逆转，只能通过减缓退化进程或提早发现以减少损失。林清泉 等 首次提出以菌株对溴百里酚蓝的脱色率作为依据用于快速鉴别蛹虫草退化菌株。由于该试验样品 基本为单交配型菌株且未研究产量与菌株脱色率间的关系，本试验拟研究不同交配型蛹虫草菌株对溴百 里酚蓝脱色率的准确性及脱色能力是否与菌株产量相关，以期通过脱色率筛选出高产优质菌株。 ｌ材料与方法 １．１供试材料 供试菌株共２３株，编号为ＣＭ一１一ＣＭ一２３，分别从辽宁、山东、江苏等地收集而来，均由上海市农业 科学院食用菌研究所保存。 １．２培养基 本试验所用的培养基有ＰＤＡ培养基（土豆２００ ｇ，葡萄糖２０ ｇ，琼脂２０ ｇ，水１０００ ｍＬ）、脱色培养基 。 １．３ ＩＴＳ（Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ Ｓｐａｃｅｒ）鉴定 将各菌株收集的菌丝，依照Ｑｉａｇｅｎ试剂盒使用方法提取ＤＮＡ，一２０℃保存备用。采用ＩＴＳ １和ＩＴＳ ４＿８ 对供试菌株的ＤＮＡ进行ＩＴＳ扩增。ＰＣＲ反应体系（２０ Ｌ）：Ｍｉｘ １０ ，引物各１ ，模板ＤＮＡ １ ， ｄｄＨ，０ ７ ｊｘＬ。ＰＣＲ反应条件：９４℃预变性３ ｍｉｎ；９４ ｑＣ变性３０ Ｓ，５５ ｏＣ退火３０ ｓ，７２ ｏＣ延伸１ ｒａｉｎ，共３０次 循环；７２℃补齐５ ｍｉｎ。产物经１％琼脂糖凝胶电泳检测有单一条带的送往上海生工生物工程有限公司测 序，所得序列利用ＤＮＡＭＡＮ软件与ＮＣＢＩ网站下载的蛹虫草ＩＴＳ序列比对。 １．４交配型鉴定 蛹虫草的交配型位点存在两种不同源的交配型基因：ＭＡＴ—ａｌｐｈａ和ＭＡＴ—ＨＭＧ 。ＭＡＴ—ａｌｐｈａ基 因包含两个连锁的交配型基因序列：ＭＡＴ １—１—１和ＭＡＴ １—１—２。ＭＡＴ—ＨＭＧ基因仅含有一种交配型 基因序列ＭＡＴ １—２—１。故通过检测ＭＡＴ １—１—１和ＭＡＴ １—２—１的有无就可断定蛹虫草的交配型。 交配型ＭＡＴ １—１—１基因ＰＣＲ扩增采用自行设计的引物Ｆ１（５ 一ＣＧＣＧＣＡＡＡＡＣＧＡＣＣＡ１ＴｒＧＡＡ一３ ）和 Ｒ１（５ 一ＡＴＡＴＡＣＣ１ＴｒＣＧｃＧＡＴＣＡＴＴＧ一３ ），交配型ＭＡＴ １—２—１基因扩增引物参考自汪虹等¨ 的研究， 扩增弓Ｉ物为Ｆ２（５ 一ＡＴＧＧＡＴｃＴＧＣＡＡＣＴＧＧＡＴＣＧＧＡＣＣＡ一３ ）和Ｒ２（５ 一ＣＴＡＣＡＴＧＡＴＴＧＡＣＴＣＣＧＣＧｃＴ－ ＣＡＴＩ＇Ｇ一３ ），以上引物均由上海杰瑞生物技术有限公司合成。ＰＣＲ反应体系（２０ ）：Ｍｉｘ １０ ，引物各 １ ｔｘＬ，模板ＤＮＡ １ Ｌ，ｄｄＨ ０ ７ 。ＰＣＲ反应条件：９４ 预变性３ ｍｉｎ；９４ ｃＣ变性３Ｏ ｓ，５５～６Ｏ （温度根 据引物Ｔｍ确定）退火３０ Ｓ，７２ ｏＣ延伸１ ｍｉｎ，共３０次循环；７２℃补齐５ ｍｉｎ。ＰＣＲ产物用１％琼脂糖凝胶 电泳检测。 １．５脱色率及产酸能力测定 先将供试菌株接种于ＰＤＡ培养基上于２５℃培养７ ｄ，用打孔器在菌落边缘位置取一菌块转接人脱色 培养基，１５０ ｒ／ｍｉｎ ２５ ｑＣ培养１０ ｄ。对照组接人等量ＰＤＡ培养基块，观察并记录培养液颜色。取适量培养 液于１０ ｍＬ离心管中，１００００ ｒ／ｍｉｎ离心３０ ｍｉｎ取上清，测定ＯＤ６ ５值和ｐＨ值，每组重复３次。菌株脱色 率Ｄ＝［１一（处理组上清液ＯＤ ／对照上清液ＯＤ ）］％１００％。 第３１卷第１期 刘敏祥，等蛹虫草菌株的交配型鉴定及其部分栽培特征研究 ４３ １．６子实体产量测定 按１．２的大米培养基配方装入栽培瓶（底径８ ＣＩＩＩ，高９．５ ｃｍ），１２１ ｏＣ灭菌５０ ｍｉｎ冷却后接入５ ｍＬ菌 株培养液，每组重复３瓶，置于２５℃避光培养１０ ｄ，然后１０ ｈ光照１４ ｈ黑暗培养直至采收。采收标准为 培养５５～７５ ｄ，子实体顶端膨大，不再增长为止… 。统计每瓶子实体产量和栽培周期等主要农艺性状，生 物学效率＝（子实体鲜重／培养料干重） １００％。 ２结果与分析 ２．１ ＩＴＳ鉴定结果 测序结果表明蛹虫草的ＩＴＳ大小基本相同，去除两端测序紊乱序列，均为５２０ ｂｐ左右，与Ｇｅｎｂａｎｋ中 蛹虫草ＩＴＳ序列（ＫＵ３５１８０９．１）相似度在９９％以上，可确定所测菌株均为蛹虫草，见图１。部分菌株出现 单个Ａ碱基的增加或缺失，个别位点出现单碱基替换（如ｃ—Ｔ），仅ＣＭ一４菌株出现Ｇ／Ａ的套峰。 ＫＩ］ ＩＲｎｑ １ ｒｆ Ａｒｆ ｒＴ ｒｆ Ａ ｆ Ａ＿ｒＡｆ （ ＴＡＴｆ：Ｃ１Ｔｌ’ ｒ ｒｒｆ＝ ｆ ｆ＝ Ａ ｒｒ Ｃ ｒＡ （ ｆ ＴＣ Ａｆ＝（ ｆ＝ｆ ＣＣｆ ｒＴ ｆ ｒ （ ｆ： ｆ Ｔ ７６ ＣＭ一１０一一Ａ．一一一一一一一一一一Ａ一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一 一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一７７ ＫＵ３５ ｌ８０９．１ ＣＧＧＧＧＧＣＣＣＣＡＡＡＣＡＣＴＧＴＡＴＣＴＡＣＣＡ（ Ｔ１ＴｒｒＣＴＧＡＡ｜ｒＣＣ（；ＣＣＧＣＡＡ【 ＣＣＡＡＡＡＡＣＡＡＡｒｒＧＡＡＴＣＡＡＡＡＣ ｒＩ－ｒＣＡＡＣ １５４ 一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一１５４ ＫＵ３５ ｌ ８０９．１ ＡＡＣＧＧＡＴＣＴＣＴｒＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＣＡＴＧＡＡＧＡＡＣＧＣＡＣＣＧＡＡＡＴＧＣＧＡＴＡＡＧＴＡＡＴＣＴＧＡＡＴＴ（ ＣＡＧＡＡ 几’ＣＡＧＴ（ ＡＡ ２３２ ＣＭ一１０一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一 —。—．—．—．—．—．—．—．—．—．—．—．—．—．—．—．—．—．—．—．—．—．—．２３２ ＫＵ３５１８０９．１ ＴＣＡＴＣＧＡＡＴＣＴｒｒＧＡＡＣＧＣＡＣＡ１，ｒＧＣＧＣＣＣＧＣＣＡＧＣＡ ｒｒＣＴＧＧＣＧ（；ＧＣＡＴＣＣＣＴＧＴＴＣＧＡＧＣＧＴＣＡＴ ｒＴＣＡＡＣＣＣＴＣＧ ３１Ｏ ＣＭ—ＪＯ一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一 一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一３１０ ＫＵ３５ １ ８０９．１ ＡＣＧＴＣＣＣＣ．ｒＧＧＧＧＧＡｒｒＧＴＣＧＧＣＧ ＩｒｒＧＧＧＧＡＣＣＧＧＣＡＧＣＡＣＡＣＣＧＣＣＧＣＣＣＣＣＧＡＡＡＴＣＡＡＧＴＧＧＣＧＧＣＣＣＧＴＣＣＧＣＧＧ ３８８ ＣＭ—ｌ０一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一 ———－—————－———－———————————．—————－—————————————－３８８ ＫＵ３５ ｌ８０９．１ ＣＧＡＣＣＴＣＴＧＣＧＴＡＧＴＡＣ ＦＣＣＡＡＣ＿ｒＣＧＣＡＣＣＧＧＧＡＡＣＣＣＧＡＣＧ｜ｒＧＧＣＣＡＣＧＣＣＧＴＡＡＡＡＣＧＣＣＣＡＡＣＴＣＴＧＡＡＣＧＴＴＧＡ ４６６ ＣＭ一１０一一一一一一Ｔ一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一 —————————————————————————————————．—．—．—．—．—．４６６ ＫＵ３５ ｌ ８０９．１ ＣＣｒｒＣＧＧＡＴＣＡＧＧＴＡＧＧＡＡＴＡＣＣＣＧＣＴＧＡＡＣＴｒＡＡＣＣＡＴＡＴＣＡＡＴＡＡＧ．ＣＧＧＡＧＧＡ ５２０ ＣＭ—１０一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一．一一一一一一一 ５２０ 图１序列对位排列情况 Ｆｉｇ．１ Ｔｗｏ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ２．２交配型鉴定结果 图２ ２３株蛹虫草交配型基因ＰＣＲ鉴定图谱 Ｆｉｇ．２ ＰＣＲ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｔｉｎｇ—ｔｙｐｅ ｇｅｎｅ ｏｆ ２３ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ Ｃ．ｍｉｌｉｔａｒｉｓ 泳道Ｍ：Ｄ２０００ Ｍａｒｋｅｒ；泳道１～２３：ＣＭ—ｌ～ＣＭ一２３菌株的扩增产物；泳道２４：阴性对照；Ａ：ＭＡＴ １—１—１交配基因扩增图 安徽科技学院学报 谱；Ｂ：ＭＡＴ １—２—１交酉 基 扩增图谱 Ｌａｎｅ Ｍ：Ｄ２０００ Ｍａｒｋｅｒ；ｌａｎｅｓ １～２３：ａｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｆｒｏｍ ｓｔｒａｉｎｓ ＣＭ一１一ＣＭ一２３：ｌａｎｅ ２４：ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ：Ａ：ＰＣＲ ａｎａｐｌｉｉｃａｔｉｆｏｎ ｏｆ ＭＡＴ１—１—１；Ｂ：ＰＣＲ ａｍｐｌｉｉｃａｔｆｉｏｎ ｏｆ ＭＡＴ１—２—１ 运用ＰＣＲ方法对２３株供试菌株进行交配基因型鉴定，结果如图２所示。根据电泳图２可知１～１０泳 道呵以扩增出ＭＡＴ １—１—１和ＭＡＴ ｌ一２一ｌ基因对应条带，而ｌ１～２３泳道只扩增出ＭＡＴ １一ｌ一１基 对应条带；即表示ＣＭ一１～ＣＭ—１０菌株为双交配型，ＣＭ～ｌｌ～ＣＭ一２３菌株均为单交配型，且均为ＭＡＴ —ａｌｐｈａ基因型。 表１ 不同蛹虫草菌株脱色率、产量及栽培周期比较 Ｔａｂｌｅ ｌ Ｆｈｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｔ’ｄｅｃｏｌｏｒｉｚａｔｉｏｎ ｒａｔｅ，ｆｒｕｉｔｉｎｇ ｂｏｄｙ ｙｉｅｌｄ ａｎｄ ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ ｐｅｒｉｏｄ ｏｆ Ｃ．ｎｌｉｌｉｔａｒＬ￣ ２．３脱色率及产量测定结果 注：ｌ司列数据后不同字母表示经方差分析在０．０５差异 著． Ｎｏｔｅ：Ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒ ｍｅａｎｓ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＜０．０５，Ｄｕｎｃａｎ）． 由表１可见，双交配型蛹虫草脱色率明显高于单交配型蛹虫草，双交配型菌株最低脱色牢为６３．１％， 而单交配型菌株最高脱色率仅５３．４％。双交配型菌株培养液ｐＨ值也明显低于单交配型菌株培养液，说 明蛹虫草培养过程中菌液ｐＨ值与其对ＢＴＢ的脱色能力呈负相关，相关系数为一０．９１。ＣＭ一１９单瓶产量 最高为１８．９６ ｇ，生物学效率为６３．２％，但其子实体顶端易分支；ＣＭ—ｌ和ＣＭ一６栽培周期最短，较ＣＭ一 １９缩短１ ｌ ｄ，生物学效率为５１％一５３％（图３）。 图３ 蛹虫草菌株人工栽培子实体形态 Ｆｉｇ．３ Ｔｈｅ ｃｕｈｉｖａｔｅｄ ｆｒｕｉｔｉｎｇ ｂｏｄｙ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｃ．ｍｉｌｉｔａｒｉｓ 第３１卷第１期 刘敏祥，等蛹虫草菌株的交配型鉴定及其部分栽培特征研究 ４５ ３结论与讨论 研究表明蛹虫草具有两种不同源的交配型基因，尽管单交配型菌株也能出菇，但子实体上没有子囊壳 和子囊孢子，不能完成有性生活史＿１ 。本试验中双交配型菌株子实体均有子囊壳，但子实体形态有圆 头和尖头之分，尖头子实体上子囊壳较稀疏；而单交配型菌株子实体形态差异较大，顶端多分支，均无明显 子囊壳；通过比较子实体产量、形态和栽培周期等性状，笔者认为ＣＭ一１９为最优菌株，当然，子实体虫草 素和腺苷含量也是筛选优良蛹虫草菌株的重要指标，有待进一步测定。 蛹虫草在生长的过程中会分泌一些代谢产物，来调节外界环境的ｐＨ值以适合自身生长＿１ 。本试验 所用培养液原始ｐＨ值为８．１，接种培养１０ ｄ后ｐＨ值均有所下降，但双交配型菌株的培养液ｐＨ值降低幅 度更大。或许预示着不同交配型的蛹虫草菌株最适的培养基ｐＨ值不同，即双交配型菌株适合酸性培养 基，而单交配型菌株适合中性培养基。 尽管蛹虫草菌株对ＢＴＢ的脱色能力和产量间不存在明显相关性，但双交配型菌株对ＢＴＢ的脱色能力 明显强于单交配菌株。在不具备蛹虫草交配型分子鉴定的实验条件下，可以通过测定蛹虫草菌株对ＢＴＢ 的脱色能力而对其交配型进行预测。ＢＴＢ作为一种酸碱指示剂，可以直观地体现不同交配型菌株培养液 的酸碱差异，但不同交配型蛹虫草脱色机理还有待进一步研究。 参考文献： ［１］宋斌，林群英，李泰辉，等．中国虫草属已知种类及其分布［Ｊ］．菌物研究，２００６，４（４）：１０—２６． 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